Metode biochimice utilizate in aprecierea efectului poluantilor din mediu asupra organismului

5x puncte

categorie: Chimie

nota: 8.01

nivel: Liceu

Mod de lucru : în balonul cu fundul rotund de la aparatul de distilat mercur se introduc 2 g păr, câțiva ml de apă bidistilată, 10 ml acid azotic, 10 ml apă oxigenată și 2 ml clorură stanoasă 10% în acid clorhidric. Se fixează balonul la parat și se da drumul la foc foarte încet. Se distilează aproximativ 1/2 oră și se continuă determinarea la fel ca la determinarea mercurului din apă.

DOWNLOAD REFERAT

Preview referat: Metode biochimice utilizate in aprecierea efectului poluantilor din mediu asupra organismului

Mod de lucru : în balonul cu fundul rotund de la aparatul de distilat mercur se introduc 2 g păr, câțiva ml de apă bidistilată, 10 ml acid azotic, 10 ml apă oxigenată și 2 ml clorură stanoasă 10% în acid clorhidric. Se fixează balonul la parat și se da drumul la foc foarte încet. Se distilează aproximativ 1/2 oră și se continuă determinarea la fel ca la determinarea mercurului din apă.

Determinarea plumbului în sânge

Generalități: plumbul se găsește în sânge atât sub forma anorganică cât și legat de unele substanțe organice. Cea mai mare parte a plumbului din sânge, se găsește în eritrocite. Concentrația plumbului în sânge ne dă indicații cu privire la indigestia și eliminarea lui în organism, mai precis la cantitatea de plumb pe care organismul o fixează. Principiul metodei: plumbul are proprietatea de a reacționa cu difenilcarbazona, în mediul alcalin cu care formează un complex colorat în roșu, ditizonatul de plumb, colorimetrabil.

Reactivi:

-acid azotic (d= 1,40);
-acid azotic 1% și 0,05% în clorofrom;
-cloroform;
-ditizonă 0,01% și 0,05% în cloroform;
-soluția tampon de citrat;
-soluția de spălare;
-soluția etalon stoc pentru plumb;
-soluția etalon de lucru;
-acid tricloracetic 10% și 5%;
-acid percloric 70%.

Recoltarea: sângele se recoltează prin puncție venoasă cu un ac sterilizat prin fierbere în apă distilată, pe fluorura de sodiu (0,1) ca anticoagulant. Modul de lucru: 10 ml de sânge bine omogenizat se introduc într-o eprubeta de centrifugă de 50 ml în care se află 10 ml apă bidistilată. Se amestecă bine cu o baghetă de sticlă pentru a se realiza hemoliza și apoi se adaugă 10 ml acid tricloracetic 10%, picătură cu picătură sub agitare continuă. Se lasă apoi o oră în repaus și se centrifughează la 3000 turații, timp de 5’.

Supernatantul se trece într-o capsula de porțelan. În eprubeta de centrifugă se mai adaugă 10 ml acid tricloraceti. Se adaugă 5 ml acid azotic 5% și se amestecă bine centrifugâdu-se din nou. Supernatantul se separă în aceeași capsulă. Peste fracțiunile extrase în tricloracetic se adaugă 5 ml acid azotic concentrat (d = 1,42) și se încălzește pe baia de nisip până rămân aproximativ 5 ml lichid. După ce s-a răcit se adaugă 0,5 ml până la uscare. Dacă reziduul nu este alb se mai adaugă 1 ml acid azotic și 2-3 picături de acid percloric și se evaporă din nou la sec. Se repetă operația până ce reziduul este perfect alb.

Se adaugă apoi 2 ml apă bidistilată și se evaporă iarăși până la sec. Peste reziduul uscat se adaugă 10 ml acid azotic (1 :25) și apoi conținutul se trece cantitativ într-o pâlnie de separare cu porțiuni mici de apă bidistilată (să nu depașească volumul final 40 ml). Se adaugă 15 ml soluție tampon și dacă proba se tulbură se mai adaugă soluție tampon până la limpezirea completă. Paralel se face o probă martor folosind 15 ml acid tricloracetic care se tratează la fel ca și proba. În continuare se procedează la fel pentru determinarea plumbului în apă și aer.

Calcul : ug Pb/100 ml sânge = C x 10
C = concentrația în ug Pb din proba de sânge luată în lucru;
Obs.: valoarea normală a plumbemiei este de 30 ug/100 ml sânge.

Determinarea plumbului în urină

Generalități: plumbul în urină se găsește sub formă de combinații organice și anorganice. Concentrația plumbului din urină ne poate da unele indicații cu privire la impregnarea organismului cu plumb. Principiul metodei: plumbul are proprietatea de a reacționa cu ditizona, în mediu alcalin cu care formează un complex colorat în roșu, ditizonatul de plumb, colorimetrabil.

Reactivi:

-acid azotic (d= 1,40) ;
-acid azotic 1% și 0,05%;
-cloroform;
-ditizonă 0,01% și 0,05%;
-soluția tampon de citrat ;
-soluția de spălare;
-soluția etalon stoc;
-soluția etalon de lucru;
-permanganat de potasiu, soluție saturată;
-soluție de hidroxilamină 10%.

Recoltarea: urina se recoltează în vase bine spălate cu detergent și clătite cu o soluție de acid azotic 1:10 și cu apă bidisitlată. Recoltarea urinei se face din prima emisiune de dimineață sau din urina colectată în 24 de ore. Mod de lucru: într-o capsulă de porțelan se introduc 25 ml urină și se adaugă 2,5 ml acid azotic (d = 1,42) și 8,5 ml soluție saturată de parmanganat de potasiu. Se încălzește pe baia de nisip, moderat, până ce lichidul supernatant devine limpede și incolor. Pe fundul vasului trebuie să persiste un rest de precipitat brun.

În caz contrar se mai adaugă câțiva ml de permanganat continuâdu-se încălzirea. După răcirea parțială a soluției, se tratează excesul de permanganat cu hidroxilamină, adăugându-se picătură cu picătură până la dispariția completă a precipitatului brun și apoi un exces de 2 ml. Paralel cu proba de urina se face un martor cu apă bidistilată și care se lucrează în aceleași condiții ca și proba. Se trece continutul din capsulă cantitativ într-o pâlnie de separare cu porțiuni mici de apă bidistilată să nu depășească 40 ml. Se adaugă 15 ml soluție tampon până la limpezirea completă.

Calcul: ug Pb/dm3 urina= c/v ·V24
C= concentrația în ug Pb din proba de urină luată în lucru
V= cantitatea de urină luată în lucru, în ml
V24= cantitatea totală de urina eliminată în 24 de ore în ml
Obs.: Valoarea normală a plumbului în urină este de 50 ug/urina/24 ore.

Determinarea enzimei ∆ amino-levulinic
Dehidraza (ALA-dehidraza)

Generalități: enzima ALA-dehidraza intervine în biosinteza hemului la etapa de cuplare a celor două molecule de acid molecule de acid ∆ amino-levulinic pentru a forma porfobilinogenul, precursorul nucleului porfirinic. Activitatea acestei enzime este inhibată în cazul expunerii organismului la plumb. Principiul metodei: activitatea ALA-dehidrazei se determină prin dozarea colormetrică a porfobilinogenului din sânge înainte și după incubarea sângelui total cu acid ∆ amino-levulinic ca substrat.

Reactivi:

-acid ∆ amino-levulinic 0,01 M;
-reactiv;
-deproteinizant: acid tricloracetic 10%;

Recoltarea probelor: sângele se recoltează prin puncție venoasă pe heparină. Mod de lucru: în 2 eprubete de centrifugă care se notează cu P și M se introduc în fiecare câte 0,2 ml sânge heparinizat și 1,3 ml apă bidistilată, se amestecă ușor și apoi se introduc într-o baie termostat la 37˚C timp de 10’ pentru realizarea hemolizei. În eprubeta P se introduce 1 ml acid ∆ amino-levulinic (substrat) iar în eprubeta M 1 ml acid tricloracetic, se agită și apoi 1 ml acid ∆ amino-levulinic. Ambele eprubete se țin la incubat timp de 60’ la 37˚C. După incubare se adaugă și în eprubeta P 1 ml acid tricloracetic. Se centrifughează ambele eprubete la 3000 rotații timp de 10’. Se ia din supernatant câte 1 ml și se introduce în alte 2 eprubete peste care se adaugă 1 ml reactiv Ehrlich.

Calcul: unități ALA-dehidraza/ml eritrocite = 12,5 x E60 – E0/ % hematocrit x1000
E60= valoarea extincției probei din eprubeta P.
E0= valoarea extincției din eprubeta M.
Obs.: se consideră ca valori normale pentru activitatea ALA-dehidrazei 25 unități/l de eritrocite.

Determinarea hematocritului
(volumul eritrocitelor)
Principiul metodei: sângele se centrifughează și se separă eritrocitele de plasmă iar prin evaluarea raportului cantitativ între ele se obține volumul eritrocitelor.

Reactivi și material necesar:

-centrifuga;
-anticoagulant-heparina;
-material pentru recoltarea sângelui prin puncția venoasă;
-hematocrit.

Recoltarea probei de sânge: sângele se recoltează prin puncție venoasă heparina (o picătură de heparină este suficientă pentru 5 ml sânge). Mod de lucru: sângele se introduce în hematocrit și se centrifughează la 4000 rotatii timp de 20’. După centrifugare se măsoară înălțimea „h” a coloanei de eritrocite și înălțimea „H” a coloanei totale de sânge. Dacă tubul este gradat în mm se face citirea direct, dacă nu este gradat, înălțimea se măsoară cu ajutorul unei rigle.

Calcul: hematocrit% =100 x h/H.
h= înălțimea coloanei de eritrocite, în mm;
H= înălțimea coloanei totale de sânge, în mm;
Obs.: valori normale ale hematocritului: bărbați 44,9%; femei 40,7%.
« mai multe referate din Chimie

CAUTA REFERAT

TRIMITE REFERAT CERE REFERAT
Referatele si lucrarile oferite de E-referate.ro au scop educativ si orientativ pentru cercetare academica.
Confidentialitatea ta este importanta pentru noi

E-referate.ro utilizeaza fisiere de tip cookie pentru a personaliza si imbunatati experienta ta pe Website-ul nostru. Te informam ca ne-am actualizat termenii si conditiile de utilizare pentru a integra cele mai recente modificari privind protectia persoanelor fizice in ceea ce priveste prelucrarea datelor cu caracter personal. Inainte de a continua navigarea pe Website-ul nostru te rugam sa aloci timpul necesar pentru a citi si intelege continutul Politicii de Cookie. Prin continuarea navigarii pe Website-ul nostru confirmi acceptarea utilizarii fisierelor de tip cookie conform Politicii de Cookie. Nu uita totusi ca poti modifica in orice moment setarile acestor fisiere cookie urmarind instructiunile din Politica de Cookie.


Politica de Cookie
Am inteles